home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ Shareware Overload Trio 2 / Shareware Overload Trio Volume 2 (Chestnut CD-ROM).ISO / dir26 / med9410p.zip / M94A3318.TXT < prev    next >
Text File  |  1994-10-25  |  3KB  |  42 lines
  1.        Document 3318
  2.  DOCN  M94A3318
  3.  TI    LTR-directed homologous recombination of HIV-1 proviral clone in recA(-)
  4.        bacteria.
  5.  DT    9412
  6.  AU    Yamada K; Nakano T; Okamoto T; Dept. Mol. Genetics, Nagoya City Univ.
  7.        Med. School, Aichi, Japan.
  8.  SO    Int Conf AIDS. 1994 Aug 7-12;10(1):103 (abstract no. PA0029). Unique
  9.        Identifier : AIDSLINE ICA10/94369257
  10.  AB    OBJECTIVE: In this study we have attempted to clarify the genetic
  11.        mechanism of frequent homologous recombination (HR) during cloning of a
  12.        full length HIV-1 plasmid in recA(-) host bacteria. METHODS: A plasmid
  13.        containing the full length HIV-1 sequence, pNL432, was transfected into
  14.        various recA(-) bacterial strains. The frequency of the appearance of HR
  15.        was measured in bacterial colonies when transfected with a closed
  16.        circular or linealized plasmid DNA. RESULTS: When pNL432 DNA was
  17.        digested at a unique site within the HIV sequence, we frequently
  18.        observed generation of mutant truncated clones lacking the entire
  19.        proviral sequence except one copy of the LTR (HR). The frequency of HR
  20.        was compared with different DNA forms in various recA(-) hosts.
  21.        Interestingly, those bacterial strains previously characterized with its
  22.        low-rate recombination showed higher rate of HR when the linealized
  23.        plasmid was transfected. The nucleotide sequences at the junction point
  24.        will be presented at the meeting. DISCUSSION AND CONCLUSIONS: From the
  25.        above observations the following possibilities were entertained: (1) HR
  26.        might occur due to an unknown mechanism other than the recA system or,
  27.        (2) recA(-) phenotype in the tested bacteria might be leaky and it
  28.        became detectable by using the linealized plasmid. Therefore, caution
  29.        should be taken when plasmid constructions are attempted using a
  30.        full-length virus HIV-1 clone. It is noteworthy to consider this
  31.        possibility when genetic engineering using a retroviral full length
  32.        clone is attempted. Moreover, this system might be useful for the study
  33.        of molecular mechanism of HR.
  34.  DE    Bacteria/GENETICS  Cloning, Molecular  Genes, Bacterial  Genetic
  35.        Engineering  *HIV Long Terminal Repeat  HIV-1/*GENETICS  Phenotype
  36.        Plasmids/GENETICS  Proviruses/*GENETICS  *Recombination, Genetic
  37.        Transfection  MEETING ABSTRACT
  38.  
  39.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  40.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  41.  
  42.